标记定量蛋白质组学

TMT/iTRAQ定量蛋白质组表达谱分析

iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation) 和 TMT(Tandem Mass Tags) 技术是分别由美国 AB Sciex 公司和 Thermo 公司研发的多肽体外标记定量技术。不同标记试剂与来源于不同样品胰酶消化后的肽段结合，经过色谱分离，并通过一级质谱和二级质谱。平衡基团在二级质谱时发生中性丢失，而报告基团在二级质谱低质量区域产生多个报告离子，其信号强度分别代表该标记样品的表达量，根据报告离子的峰面积计算同一蛋白质同一肽段在不同样品间的比值，从而实现蛋白的相对定量。

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研究流程

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样本要求

• 常规动物组织≥ 100mg
• 常规植物组织≥ 500mg
• 微生物≥ 150 μL
• 细胞≥ 45 μL
• 纯蛋白≥300µg
• 血清/血浆≥ 750µL
• 尿液≥ 15ml
• 唾液、泪液≥ 3 mL
• 脑脊液≥ 750µL
• 淋巴液、关节液、穿刺液≥ 7.5ml

• FFPE石蜡包埋切片（每片厚度10 μm，面积1.5×2 cm）≥23片
• 外泌体≥ 500μL

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分析结果

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案例分析

【项目文章】肝癌干预分子机制——独立于经典 Akt 的新路径发现 The AKT-Independent MET–V-ATPase–MTOR Axis Suppresses Liver Cancer Vaccination

发表期刊：Signal Transduction and Targeted Therapy       影响因子：13.493 发表日期：2020年8月       发表单位：浙江大学

研究背景

由于高致死率，肝癌的早期诊断和治疗仍是目前难点。主要在于疫苗接种被认为是预防和辅助治疗的一种理想手段，但目前没有正式推行的肝癌疫苗，对肝癌的免疫原性抑制 分子机制不明。文章关注到和肝癌免疫原性重点相关的MET蛋白，并发现了独立于经典MET–AKT–MTOR通路外的MET–V-ATPase–MTOR 路径，和其在肝癌干预中潜在作用。

结论

文章发现 MET 能作为“把关者”抑制肝癌细胞免疫原性，蛋白质组检测发现其独立于经典 Akt 通路外的下游作用靶点 V-ATPase，而抑制 MET–V-ATPase–MTOR 通路后，肝癌保护效用明显加强，结论为肝癌药物干预的靶点及其候选药物提供了理论参考。

参考文献

Huang Xing,Xu Xingyuan,Wang Xun et al. The AKT-independent MET-V-ATPase-MTOR axis suppresses liver cancer vaccination.[J] .Signal Transduct Target Ther, 2020, 5: 122